Điều quan trọng trong quy trình nuôi cấy vi khuẩn là kị không gửi thêm vi trùng ngoại lây nhiễm vào môi trường xung quanh nuôi cấy. Do vậy, xung quanh các thao tác luôn phải được triển khai trong điều kiện vô trùng hay đối, gần như yếu tố trường đoản cú môi trường, quy định chứa, biện pháp nuôi cấy đến những vật dụng quan trọng đều phải được khử trùng trước lúc sử dụng.

Bạn đang xem: Phân lập là gì

Phương pháp phân lập, nuôi cấy vi trùng là gì?

Phân lập là khâu đặc trưng trong quá trình nghiên cứu nuôi ghép vi khuẩn.

Mục đích của cách thức phân lập là tách bóc riêng những vi trùng từ quần thể lúc đầu tạo thành những clon tinh khiết để khảo sát điều tra và định loại. Khi vi khuẩn tăng trưởng và cách tân và phát triển trên bề mặt môi trường rắn đã tạo nên những khuẩn lạc, hình thái của các khuẩn lạc sẽ mang ý nghĩa đặc trưng của từng nhiều loại vi khuẩn. Việc mô tả đúng chuẩn các trùng lạc đã bóc tách rời hoàn toàn có thể góp phần rất đặc biệt trong bài toán chẩn đoán vi trùng học. Những nhà nghiên cứu và phân tích vi khuẩn học đã tiêu chuẩn hoá có ý nghĩa khi diễn tả hình dáng, độ dài và bờ, rìa của trùng lạc.

Điều quan liêu trọng cách nuôi vi khuẩn là kiêng không chuyển thêm vi sinh đồ dùng ngoại truyền nhiễm vào môi trường thiên nhiên nuôi cấy. Bởi vậy, bên cạnh các thao tác làm việc luôn buộc phải được thực hiện trong đk vô trùng xuất xắc đối, phần nhiều yếu tố trường đoản cú môi trường, chính sách chứa, pháp luật nuôi cấy đến những vật dụng cần thiết đều đề xuất được khử trùng trước khi sử dụng.

*

Điều đặc biệt cách nuôi vi khuẩn là né không đưa thêm vi sinh vật dụng ngoại lan truyền vào môi trường xung quanh nuôi cấy

Các dạng mẫu đến nuôi ghép và nguyên tắc cấy

Dạng mẫu mã nuôi cấy

Dạng dịch mẫu chỉ định nuôi ghép vi khuẩn đã được đồng nhất, dịch nuôi cấy hoặc môi trường thiên nhiên lỏng đựng chủng vi sinh vật nên phân tích.

Dạng trên bề mặt của môi trường xung quanh rắn chứa thạch (từ 1,5-2%) trong ống thạch nghiêng giỏi trong đĩa petri.

Dạng mẫu nằm sâu trong môi trường rắn trong ống thử thạch sâu chứa thạch mềm (0,5-0,7%).

Dụng cố kỉnh cấy

Que cấy thẳng: Que cấy sắt kẽm kim loại có đầu nhọn, dùng để làm cấy vi khuẩn có tạo khuẩn ty.

Que ghép móc: Đây là que cấy có đầu vuông góc, dùng để làm cấy vi khuẩn có tạo ra khuẩn ty.

Que ghép vòng: Là que cấy kim loại đầu bao gồm vòng tròn, cần sử dụng cấy chủng từ môi trường xung quanh rắn hoặc lỏng lên môi trường thiên nhiên rắn, lỏng.

Que cấy trang: Là que bằng sắt kẽm kim loại hay thủy tinh, đầu hình tam giác, dùng làm dàn trải vi khuẩn trên bề mặt thạch rắn.

Ống hút thủy tinh: dùng để làm chuyển một lượng vi khuẩn quan trọng lên bề mặt môi trường rắn hoặc vào môi trường xung quanh lỏng.

Đầu tăm bông vô trùng: dùng để làm cấy như là từ môi trường lỏng lên mặt phẳng của môi trường thiên nhiên rắn.

Các cách thức phân lập, nuôi ghép vi khuẩn

*

Có những phương thức phân lập, nuôi cấy vi trùng nào?

Kỹ thuật ghép ria bên trên đĩa petri

Dùng que ghép vòng thao tác vô trùng nhúng vào dịch mẫu để có các vi trùng muốn phân lập.

Ria các đường bên trên đĩa petri có chứa môi trường thiên nhiên thạch ham mê hợp. Sau mỗi mặt đường ria liên tục, hãy đốt khử trùng que ghép và có tác dụng nguội trước lúc thực hiện thao tác làm việc tiếp theo.

Lật ngược đĩa và ủ sống nhiệt độ, thời gian tương thích trong tủ ấm.

Kỹ thuật cấy trang

Dùng pipet đưa 0,1ml dịch canh trùng lên trên bề mặt môi ngôi trường thạch vào đĩa petri.

Nhúng đầu thanh gạt vào động và hơ qua ngọn lửa để khử trùng. Sau đó, nhằm đầu thanh gạt nguội trong không khí vô trùng của ngọn lửa.

Mở đĩa petri, dìu dịu thanh gạt lên mặt phẳng thạch của đĩa petri. Sử dụng đầu thanh gạt trải phần đông dịch vi khuẩn lên trên mặt phẳng thạch. Quá trình thực hiện nay hãy luân phiên đĩa một vài lần, những lần khoảng nửa chu vi đĩa nhằm tạo điều kiện cho thanh gạt trải dịch vi khuẩn đều khắp bề mặt môi trường.

Lật ngược đĩa cùng ủ nghỉ ngơi nhiệt độ, thời gian tương thích trong tủ ổn định nhiệt.

Cấy tương đương từ môi trường xung quanh lỏng sang ống nghiệm chứa môi trường xung quanh lỏng

Đốt nóng đỏ đầu que ghép trong ngọn lửa rồi hơ vơi phần cán, rồi núm thẳng đứng que ghép cho que cấy nóng đều.

Tay trái cố kỉnh ống nghiệm xoay nhẹ, tay yêu cầu cầm que cấy. Dùng ngón út ít của tay phải đặt mở nút bông. Sau khi mở nút bông, luân phiên miệng ống nghiệm qua ngọn lửa.

Đưa que cấy đã khử trùng vào bên trong ống nghiệm và có tác dụng nguội que cấy (áp đầu que ghép vào thành ống mang đến nguội). Nhúng que ghép vào môi trường thiên nhiên lỏng, rút trực tiếp que ghép ra ko để kết dính thành cùng miệng ống để thu sinh khối. Hơ nóng mồm ống nghiệm và bít nút bông rồi để ống nghiệm vào giá bán đỡ.

Đầu que nuôi cấy vi khuẩn được giữ ở vùng không gian vô trùng gần ngọn đèn. Sử dụng tay trái đem ống nghiệm chứa môi trường thiên nhiên mới rồi mở nút bông cùng khử trùng miệng ống nghiệm. Tiếp đó, đưa đầu que ghép vào phía bên trong môi trường.

Nhúng cùng khuấy dìu dịu que cấy trong dịch môi trường để bóc sinh khối thoát ra khỏi đầu que cấy.

Rút trực tiếp đầu que ghép ra. Diệt trùng miệng ống nghiệm và bít nút bông.

Khử trùng que ghép ngay sau khi cấy xong.

Cấy tương đương từ môi trường lỏng thanh lịch ống thạch nghiêng

Phương pháp này triển khai tương từ như trên, nhưng có một số biệt lập sau:

Cấy như thể lên trên mặt phẳng thạch nghiêng bằng phương pháp đặt nhẹ đầu que ghép lên mặt phẳng môi ngôi trường ở đáy ống.

Sau đó, cấy theo như hình chữ bỏ ra từ lòng ống nghiệm lên tới đầu xung quanh thạch nghiêng.

Cấy giống như từ môi trường xung quanh lỏng bằng pipet đầu rời

Pipet đầu rời có thể chấp nhận được thao tác đúng đắn với những khoảng không nhỏ. Trong thao tác vô trùng, pipet đầu rời rất hữu ích vì nó cho phép cấy chuyển dễ dàng dịch vi khuẩn lên bề mặt môi trường rắn vào đĩa petri để sinh sản khuẩn lạc tách hoặc vào ống nghiệm hoặc bình chứa môi trường lỏng nhằm nuôi tăng sinh. Trước khi sử dụng, kiểm nghiệm viên cần biết các yêu cầu cơ bản trong cách nuôi vi khuẩn với pipet đầu tách như sau:

*

Pipet đầu rời cho phép thao tác chính xác với những thể tích nhỏ

Mỗi pipet đầu rời đều phải sở hữu giới hạn khoảng không gian thao tác chất nhận được nhất định đó là: 0,1 ml, 1- 20ml, 20- 20ml, 0,2- 1 ml, 1-5 ml, 1- 10 ml. Hãy chọn pipet đầu tách với số lượng giới hạn dung tích phù hợp cho phạm vi thao tác.

Pipet đầu rời tất cả hai nấc: nấc 1 tương đương với dung tích được chọn sử dụng khi hút dung dịch; nấc 2 (vượt thừa nấc 1) dùng để làm bơm dung dịch thoát ra khỏi đầu tip của pipet đầu rời.

Khi sử dụng pipet đầu rời để cấy vận động và di chuyển giống thì nên cần phải triển khai trong không khí vô trùng của ngọn lửa phía trong gầm tủ cấy.

Tay buộc phải cầm pipet đầu rời, tay trái mở hộp đựng đầu tip vô trùng. Sau đó, cắn đầu pipet vào đầu tip.

Dùng tay trái duy trì ống nghiệm với bình cất dịch giống như vi sinh vật. Cần sử dụng ngón út, áp út ít của tay phải đang nắm giữ pipet nhằm kẹp giữ cùng mở nút bông, kế tiếp hơ nóng khử trùng miệng ống nghiệm hoặc bình chứa.

Đưa đầu tip vô trùng vào phía bên trong dịch giống như rồi hút mang dung tích phải thiết. Sau đó, rút đầu tip thoát khỏi miệng bình chứa, khử trùng miệng bình cất và đậy bởi nút bông đang rất được giữ nghỉ ngơi ngón út cùng áp út tay phải.

Đầu tip bao gồm chứa vi sinh vật rất cần được giữ ở vùng không gian vô trùng ngay sát ngọn đèn.

Dùng tay trái mang ống nghiệm hoặc bình chứa môi trường mới, dùng ngón út với áp út kẹp với mở nút bông, vô trùng miệng bình chứa.

Đưa đầu tip vào bên phía trong môi trường rồi bơm dịch giống vào môi trường. Sau đó, rút đầu tip ra khỏi miệng bình chứa, vô trùng miệng bình và bịt nút bông.

Đầu pipet đầu rời và đầu tip được chế tạo bằng polymer cần được khử trùng tuyệt cạnh tranh pipet và đầu tip bằng ngọn lửa.

Xem thêm: " Distention Là Gì ? Distension Tiếng Anh Là Gì

Để bảo đảm sự cải cách và phát triển của vi khuẩn, sau khi nuôi cấy vi khuẩn xong phải xem xét các điều kiện môi trường xung quanh nuôi vi trùng như: ánh sáng tối ưu mang lại sự cách tân và phát triển của từng loài vi trùng và bảo trì ổn định nhiệt độ độ; nhiệt độ trong quá trình nuôi ủ cần đảm bảo đủ lượng nước; khí oxy so với vi sinh đồ dùng hiếu khí, lớp môi trường xung quanh nuôi cấy bao gồm độ dày vừa phải để oxy ko khí hoàn toàn có thể thấm vào.